Regolamento (UE) 2019/1390

Modifica del regolamento (CE) n. 440/2008

L’articolo 1 dispone la modifica dell’allegato del regolamento (CE) n. 440/2008 conformemente all’allegato del regolamento. L’aggiornamento recepisce nuovi metodi OCSE e sostituisce o integra diversi capitoli della parte B dell’allegato.

Entrata in vigore e applicabilità diretta

L’articolo 2 prevede che il regolamento entri in vigore il ventesimo giorno successivo alla pubblicazione nella Gazzetta ufficiale dell’Unione europea. Il regolamento è obbligatorio in tutti i suoi elementi e direttamente applicabile in ciascuno degli Stati membri.

Nuovo metodo B.4: irritazione/corrosione cutanea acuta

Sostituisce il capitolo B.4 con un metodo OCSE 404 (2015) aggiornato. Rafforza l’uso di approcci integrati e basati sul peso dell’evidenza per ridurre le prove in vivo, prevede come specie di elezione il coniglio albino e dettaglia applicazione, osservazione, classificazione delle reazioni, criteri di soppressione, contenuto della relazione e definizioni di irritazione/corrosione cutanea.

Nuovo metodo B.17: mutazione genica in cellule di mammifero sui geni HPRT e XPRT

Sostituisce il capitolo B.17 con il metodo OCSE 476 (2016). Disciplina le prove HPRT/XPRT su cellule di mammifero, i sistemi di attivazione metabolica (S9), la selezione delle concentrazioni, i controlli positivi/negativi, i criteri di accettabilità, la competenza del laboratorio, la valutazione della citotossicità tramite RS e la frequenza dei mutanti.

Nuovo metodo B.22: saggio di letalità dominante nei roditori

Sostituisce il capitolo B.22 con il metodo OCSE 478 (2016). Regola una prova in vivo supplementare sui roditori per valutare mutazioni germinali con esito letale dominante, comprendendo specie, dosi, via di somministrazione, accoppiamenti, osservazioni, raccolta di tessuti, criteri statistici, controlli positivi/negativi e contenuti della relazione.

Nuovo metodo B.23: aberrazione cromosomica sugli spermatogoni di mammifero

Sostituisce il capitolo B.23 con il metodo OCSE 483 (2016). Stabilisce un saggio in vivo su spermatogoni per individuare aberrazioni cromosomiche strutturali, con dettagli su specie, tempi di campionamento, dosi, uso di inibitori della metafase, analisi citogenetica, criteri di accettabilità e interpretazione dei risultati.

Nuovo metodo B.40: corrosione cutanea in vitro mediante resistenza elettrica transcutanea (TER)

Sostituisce il capitolo B.40 con il metodo OCSE 430 (2015). Introduce una prova in vitro su pelle di ratto per distinguere sostanze corrosive e non corrosive, basata sulla misurazione della TER e, in alcuni casi, sulla fissazione del colorante, con soglia di 5 kΩ, criteri di competenza dei laboratori, controlli e criteri di classificazione anche per sottocategorie GHS/CLP.

Nuovo metodo B.40 bis: corrosione cutanea in vitro su modello di epidermide umana ricostituita (RhE)

Sostituisce il capitolo B.40 bis con il metodo OCSE 431 (2016). Regola l’uso di modelli RhE disponibili sul mercato (EpiSkin™, EpiDerm™, SkinEthic™ RHE, epiCS®) per identificare sostanze corrosive e non corrosive, con alcune capacità di sottocategorizzazione. Include controlli di qualità dei lotti, gestione dell’interferenza dell’MTT, criteri di vitalità e modelli predittivi differenziati per ciascun tessuto.

Nuovo metodo B.46: irritazione cutanea in vitro su modello di epidermide umana ricostituita

Sostituisce il capitolo B.46 con il metodo OCSE 439 (2015). Riguarda l’identificazione di sostanze irritanti cutanee e, in alcuni ordinamenti, di sostanze non classificate, mediante modelli RhE validati, con soglia di vitalità al 50 %, criteri per il controllo della qualità dei lotti, gestione di interferenze MTT e regole per la classificazione come irritante o non irritante.

Nuovi capitoli B.63 e B.64: screening della tossicità riproduttiva/sviluppo e studio combinato a dosi ripetute

Aggiunge il capitolo B.63 (OCSE 421) e il capitolo B.64 (OCSE 422), entrambi aggiornati con endpoint utili a rilevare possibili interferenti endocrini. I metodi disciplinano studi su ratti con somministrazione orale, valutazioni su fertilità, gestazione, sviluppo della prole, parametri endocrini, neurotossicità e immunotossicità, nonché criteri di dosaggio, osservazione clinica, necroscopia, istopatologia, dati da riportare e interpretazione dei risultati.

Nuovo metodo B.65: corrosione cutanea in vitro con membrana impermeabile

Introduce il metodo OCSE 435 (2015) basato sul sistema Corrositex®. Prevede una membrana artificiale e un sistema di rilevazione chimica per classificare sostanze corrosive e sottocategorie GHS/ONU, con prova di compatibilità, controlli positivi e negativi, tempi di permeazione e criteri di accettabilità e di classificazione.

Nuovo metodo B.66: saggi di transattivazione in vitro per recettori estrogenici

Introduce il metodo OCSE 455 (2016) basato su standard di prestazione. Disciplina saggi di transattivazione con trasfezione stabile per individuare agonisti e antagonisti dei recettori estrogenici, con due protocolli di riferimento principali (STTA e VM7Luc ER TA), criteri di controllo qualità, dimostrazione di competenza, interpretazione dei risultati e requisiti di relazione.

Nuovo metodo B.67: mutazione genica su cellule di mammifero con gene timidina chinasi

Introduce il metodo OCSE 490 (2016), dedicato alla prova MLA e alla prova TK6. Definisce l’uso di cellule L5178Y e TK6, la valutazione della citotossicità con RTG/RS, la selezione con TFT, la distinzione tra colonie grandi/piccole o a comparsa precoce/tardiva, i criteri di accettabilità e la classificazione positiva/negativa/equivoca.

Nuovo metodo B.68: esposizione in vitro di breve durata per danno oculare grave e non classificazione

Introduce il metodo OCSE 491 (2017). È un test STE su cellule SIRC per identificare sostanze che inducono gravi lesioni oculari o che non richiedono classificazione, con test a 5 % e 0,05 %, criteri di vitalità, esclusioni per sostanze altamente volatili o solidi non tensioattivi, e criteri di accettabilità delle prove.

Nuovo metodo B.69: modelli RhCE per sostanze non classificate per irritazione oculare o grave danno oculare

Introduce il metodo OCSE 492 (2017), utilizzando modelli di epitelio corneale umano ricostituito EpiOcular™ EIT e SkinEthic™ HCE EIT. Definisce protocolli per liquidi e solidi, gestione di interferenze MTT, soglie di vitalità per la classificazione come "senza categoria" e criteri di accettabilità e di relazione.

Nuovo metodo B.70: saggio di legame con recettore estrogenico ricombinante umano

Introduce il metodo OCSE 493 (2015) per identificare sostanze con affinità di legame agli ERα mediante saggi FW e CERI. Prevede una prova di saturazione e una competitiva con [3H]-17β-estradiolo, criteri di solubilità, controlli e criteri di accettabilità, nonché classificazione come ligando, non ligando o equivoco e uso della regola del 10 %.